Da FDA.GOV
Panoramica generale
L'emergere di infezioni da virus patogeni come l'influenza e l'HIV ha creato un urgente bisogno di nuovi vaccini.
I vaccini a base di virus sono prodotti nelle cellule viventi (substrati cellulari). Alcuni produttori stanno studiando l'uso di nuove linee cellulari per produrre vaccini. La continua crescita delle linee cellulari assicura che vi sia un approvvigionamento costante delle stesse cellule che possono produrre elevate quantità di vaccino.
In alcuni casi le linee cellulari utilizzate potrebbero essere tumorigeniche, cioè formare tumori quando iniettate nei roditori. Alcune di queste linee cellulari che formano il tumore possono contenere virus cancerogeni che non si riproducono attivamente. Tali virus sono difficili da rilevare utilizzando metodi standard. Questi virus latenti o "silenziosi" rappresentano una potenziale minaccia, poiché potrebbero diventare attivi in condizioni di produzione di vaccini. Pertanto, per garantire la sicurezza dei vaccini, il nostro laboratorio sta studiando i modi per attivare i virus latenti nelle linee cellulari e rilevare i virus attivati, così come altri virus sconosciuti, utilizzando le nuove tecnologie. Adatteremo quindi i nostri risultati per rilevare virus negli stessi tipi di substrati cellulari utilizzati per produrre vaccini. Stiamo anche cercando di identificare specifici processi biologici che riflettono l'attività del virus.
Questi metodi consentiranno agli scienziati della FDA di aiutare i produttori a determinare se il loro substrato cellulare specifico è sicuro da usare per la produzione di vaccini. I metodi che il nostro laboratorio sta sviluppando e testeranno aiuteranno a garantire la produzione di vaccini sicuri ed efficaci in due modi: 1) la FDA sarà in grado di sviluppare linee guida per i test per i produttori che usano nuovi substrati cellulari per produrre vaccini; e 2) la FDA pubblicherà i nuovi metodi sviluppati nelle riviste scientifiche peer-reviewed, rendendoli così facilmente accessibili a tutti i produttori.
Stiamo anche valutando il rischio di infezioni da retrovirus nell'uomo. (I retrovirus sono virus dell'RNA che usano un enzima chiamato reverse transcriptase (RT) per replicarsi; l'RNA è la forma decodificata del DNA). Il virus schiumoso di Simian (SFV) può essere trasmesso da primati non umani (ad esempio, scimmie) agli umani. Sebbene non vi siano prove che la SFV causi la malattia, il virus può rimanere in uno stato di calma permanente nel DNA dopo l'infezione. Inoltre, due persone in Africa sono state recentemente trovate infette da HIV-1 e da SFV. Pertanto, è importante determinare se la SFV costituisce una minaccia per la salute umana e capire come si diffonde il virus al fine di creare strategie per il controllo delle infezioni umane. Tale lavoro aiuterà anche la FDA a sviluppare una nuova politica relativa alla donazione di sangue da parte di individui che lavorano con primati non umani e all'implementazione di linee guida formali di sicurezza per le persone che lavorano con animali infetti da SFV. Stiamo anche studiando le conseguenze della doppia infezione da SFV e HIV-1 nel modello di scimmia.
*****
Continua,;
Panoramica scientifica
Rilevazione di virus latenti nei substrati cellulari per la sicurezza del vaccino. L'urgente richiesta di vaccini contro le malattie emergenti ha reso necessario l'uso di nuovi substrati cellulari. Questi includono cellule tumorigeniche quali cellule MDCK e CHO (per vaccini virus dell'influenza), 293 e cellule PER.C6 (per HIV-1 e altri vaccini adenovirus vettorizzate) cellule, e tumorali derivate quali cellule HeLa (per l'HIV-1 vaccini).
L'uso di cellule tumorigeniche e derivate da tumore è una delle maggiori preoccupazioni per la sicurezza a causa della potenziale presenza di virus come retrovirus e virus oncogenici del DNA che potrebbero essere associati a tumorigencità, pertanto, rilevamento di virus persistenti, latenti del DNA e retrovirus endogeni nel vaccino substrati cellulari è importante per la sicurezza del vaccino, in particolare nello sviluppo di vaccini virali vivi, dove non ci sono o minima inattivazione di virus e di rimozione dei passaggi durante la produzione di vaccini.
induzione chimico è un metodo rigoroso per valutare la presenza di retrovirus endogeni come pure alcuni virus a DNA latenti che hanno il potenziale di attivazione e producono virus infettivo. Questo approccio è stato ampiamente utilizzato per le cellule di topo. Abbiamo ottimizzato condizioni di induzione virali in cellule di topo usando un standardizzato, altamente sensibile, singolo tubo PCR fluorescente migliorata trascrittasi inversa (STF-PERT) dosaggio. Abbiamo ulteriormente determinato le condizioni ottimali per l'attivazione del virus del DNA latente da una linea cellulare umana. Abbiamo esteso il test per sviluppare un approccio graduale per indurre e rilevare retrovirus endogeni e virus a DNA latenti durante la valutazione di substrati cellulari per la sicurezza del vaccino.
L'algoritmo di induzione chimica sviluppato utilizzando queste linee cellulari di controllo positivo può essere utilizzato per valutare la sicurezza di substrati cellulari vaccino innovativi per nuovi vaccini. Stiamo attualmente esaminando le tecnologie emergenti per il rilevamento di virus per identificare nuovi virus indotti e sconosciuti. Inoltre, stiamo studiando potenziali biomarcatori per l'induzione del virus
Indagini in vitro e in vivo per affrontare le preoccupazioni dei retrovirus nei prodotti biologici. I virus schiumosi di Simian (SFV) sono molto diffusi in tutti i primati non umani (NHP) e possono infettare l'uomo attraverso la trasmissione tra specie. Sebbene non vi siano ancora prove di patologie con SFV, il virus infettivo persiste nel DNA ospite. Pertanto, stiamo cercando di capire la latenza SFV e l'attivazione e fattori coinvolti nella trasmissione del virus, che sarà importante per la gestione delle infezioni SFV negli esseri umani.
Stiamo anche studiando le potenziali interazioni di SFV e SIV nel modello scimmia per prevedere l'esito di SFV e HIV-1 dual-infezioni nei casi umani segnalati, in Africa. Inoltre, i nostri studi trasfusionali nelle scimmie per quanto riguarda il rischio di trasmissione SFV da donatori di sangue infetti ai destinatari contribuiranno a decisioni politiche di donazione del sangue.
pubblicazioni
Genoma announc 17 agosto 2017; 5 (33): e00827-17
sequenza completa del genoma di un naturale isolato scimmie virus spumoso da macaco rhesus (SFVmmu_K3T).
Nandakumar S, Bae EH, Khan AS
Genoma announc 2017 ago 24; 5 (34): e00829-17
sequenza intero genoma della linea cellulare di insetto Spodoptera frugiperda Sf9.
Nandakumar S, Ma H, Khan AS
PDA J Pharm Sci Technol 2016 Nov-Dec; 70 (6): 591-5
Gruppo di interesse per le tecnologie di rilevamento dei virus avanzati (AVDTIG): sforzi per il sequenziamento ad alto rendimento (HTS) per il rilevamento dei virus.
Khan AS, Vacante DA, Cassart JP, Ng SH, Lambert C, Charlebois RL, King K
Viruses 23 nov 2016; 8 (11): 318
undicesima conferenza internazionale sui virus schiumosi - rapporto sulla riunione.
Buseyne F, Gessain A, Soares MA, Santos AF, Materniak-Kornas M, Lesage P, Zamborlini A, Lochelt M, Qiao W, Lindemann D, Wohrl BM, Stoye JP, Taylor IA, Khan AS
Viruses 31 marzo 2015; 7 (4): 1651-66
Decima conferenza internazionale sui virus schiumosi 2014 - risultati e prospettive.
Materniak M, Kubis P, Rola-Luszczak M, Khan AS, Buseyne F, Lindemann D, Lochelt M, Kuzmak J
Vaccino 2015 Jan 1; 33 (1): 73-5
The Brighton Collaboration Viral Vector Vaccines Safety Working Group (V3SWG).
Chen RT, Carbery B, Mac L, Berns KI, Chapman L, Condit RC, Excler JL, Gurwith M, Hendry M, Khan AS, Khuri-Bulos N, Klug B, Robertson JS, Seligman S, Sheets R, Williamson AL
PDA J Pharm Sci Technol 2014 Nov-Dec; 68 (6): 661-6
Nuove tecnologie e sfide per il rilevamento di nuovi virus.
Khan AS, Ma H, Taliaferro LP, Galvin TA, Shaheduzzaman S
PDA J Pharm Sci Technol 2014 Nov-Dec; 68 (6): 546-7
Introduzione e sintesi del seminario: tecnologie avanzate per la rilevazione dei virus nella valutazione di applicazioni e sfide biologiche.
Khan AS, Vacante DA
J Virol 2014 Jun 15; 88 (12): 6576-85
Identificazione di un romanzo rhabdovirus nelle linee cellulari di Spodoptera frugiperda.
Ma H, Galvin TA, Glasner DR, Shaheduzzaman S, Khan AS
Virus 2014 25 aprile 2014; 6 (5): 1876-1896
Valutazione del sistema ad ampio raggio di spettrometria di massa a ionizzazione PCR-elettrospray (PCR / ESI-MS) e microarray di virus per il rilevamento di virus.
Taliaferro LP, Galvin TA, Ma H, Shaheduzzaman S, Williams DK, Glasner DR, Khan AS
J Virol 2013 ago; 87 (15): 8792-7
Identificazione della ricombinazione nel gene dell'involucro del sierotipo 2 del virus schiumoso simiano isolato dal ciclopide di Macaca.
Galvin TA, Ahmed IA, Shahabuddin M, Bryan T, Khan AS
Viruses 6 giu 2013; 5 (6): 1414-30
Influenza dei virus schiumosi simian naturali (SFV) sulla progressione della malattia SIV nel modello macaco rhesus (Macaca mulatta).
Choudhary A, Galvin TA, Williams DK, Beren J, Bryant MA, Khan AS
J Virol 2013 feb; 87 (4): 2278-86
Nessuna evidenza di trasmissione del virus correlata al virus della leucemia murina xenotropica mediante trasfusione di sangue da macachi rhesus infetti.
Williams DK, Galvin TA, Gao Y, O'Neill C, Glasner D, Khan AS
PDA J Pharm Sci Technol 2012 1 ° novembre 2012; 66 (6): 502-11
agenti avventizi PDA / FDA e nuovi substrati cellulari: tecnologie emergenti e nuove sfide, 3-4 novembre 2011, Rockville, MD.
Khan AS, Lubiniecki A, King KE
Adv Virol 2011; 2011: 787394
Xenotropic e altri virus correlati al virus della leucemia murina nell'uomo.
Khan AS, McClure M, Kubo Y, Jolicoeur P
Biologicals 2011 Nov; 39 (6): 378-83
Studio del virus correlato al virus della leucemia murina xenotropica (XMRV) nelle linee umane e di altre cellule.
Williams DK, Galvin TA, Ma H, Khan AS
PDA J Pharm Sci Technol 2011 1 ° novembre 2011; 65 (6): 627-33
Metodi di prova attuali e sfide per la rilevazione di virus avventizi.
Khan AS
PDA J Pharm Sci Technol 2011 1 ° novembre 2011; 65 (6): 685-9
Rilevazione di retrovirus latenti in substrati cellulari correlati al vaccino: studio dell'attività di RT prodotta dall'induzione chimica di cellule Vero.
Ma H, Khan AS
Vaccino 2011 26 ottobre; 29 (46): 8429-37
Indagini sul circovirus suino di tipo 1 (PCV1) in linee cellulari correlate al vaccino.
Ma H, Shaheduzzaman S, Willliams DK, Gao Y, Khan AS
J Virol 2011 Jul; 85 (13): 6579-88
Induzione chimica di particelle endogene di retrovirus dalla linea cellulare vera di scimmie verdi africane.
Ma H, Ma Y, Ma W, Williams DK, Galvin TA, Khan AS....
Panoramica generale
L'emergere di infezioni da virus patogeni come l'influenza e l'HIV ha creato un urgente bisogno di nuovi vaccini.
I vaccini a base di virus sono prodotti nelle cellule viventi (substrati cellulari). Alcuni produttori stanno studiando l'uso di nuove linee cellulari per produrre vaccini. La continua crescita delle linee cellulari assicura che vi sia un approvvigionamento costante delle stesse cellule che possono produrre elevate quantità di vaccino.
In alcuni casi le linee cellulari utilizzate potrebbero essere tumorigeniche, cioè formare tumori quando iniettate nei roditori. Alcune di queste linee cellulari che formano il tumore possono contenere virus cancerogeni che non si riproducono attivamente. Tali virus sono difficili da rilevare utilizzando metodi standard. Questi virus latenti o "silenziosi" rappresentano una potenziale minaccia, poiché potrebbero diventare attivi in condizioni di produzione di vaccini. Pertanto, per garantire la sicurezza dei vaccini, il nostro laboratorio sta studiando i modi per attivare i virus latenti nelle linee cellulari e rilevare i virus attivati, così come altri virus sconosciuti, utilizzando le nuove tecnologie. Adatteremo quindi i nostri risultati per rilevare virus negli stessi tipi di substrati cellulari utilizzati per produrre vaccini. Stiamo anche cercando di identificare specifici processi biologici che riflettono l'attività del virus.
Questi metodi consentiranno agli scienziati della FDA di aiutare i produttori a determinare se il loro substrato cellulare specifico è sicuro da usare per la produzione di vaccini. I metodi che il nostro laboratorio sta sviluppando e testeranno aiuteranno a garantire la produzione di vaccini sicuri ed efficaci in due modi: 1) la FDA sarà in grado di sviluppare linee guida per i test per i produttori che usano nuovi substrati cellulari per produrre vaccini; e 2) la FDA pubblicherà i nuovi metodi sviluppati nelle riviste scientifiche peer-reviewed, rendendoli così facilmente accessibili a tutti i produttori.
Stiamo anche valutando il rischio di infezioni da retrovirus nell'uomo. (I retrovirus sono virus dell'RNA che usano un enzima chiamato reverse transcriptase (RT) per replicarsi; l'RNA è la forma decodificata del DNA). Il virus schiumoso di Simian (SFV) può essere trasmesso da primati non umani (ad esempio, scimmie) agli umani. Sebbene non vi siano prove che la SFV causi la malattia, il virus può rimanere in uno stato di calma permanente nel DNA dopo l'infezione. Inoltre, due persone in Africa sono state recentemente trovate infette da HIV-1 e da SFV. Pertanto, è importante determinare se la SFV costituisce una minaccia per la salute umana e capire come si diffonde il virus al fine di creare strategie per il controllo delle infezioni umane. Tale lavoro aiuterà anche la FDA a sviluppare una nuova politica relativa alla donazione di sangue da parte di individui che lavorano con primati non umani e all'implementazione di linee guida formali di sicurezza per le persone che lavorano con animali infetti da SFV. Stiamo anche studiando le conseguenze della doppia infezione da SFV e HIV-1 nel modello di scimmia.
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Continua,;
Panoramica scientifica
Rilevazione di virus latenti nei substrati cellulari per la sicurezza del vaccino. L'urgente richiesta di vaccini contro le malattie emergenti ha reso necessario l'uso di nuovi substrati cellulari. Questi includono cellule tumorigeniche quali cellule MDCK e CHO (per vaccini virus dell'influenza), 293 e cellule PER.C6 (per HIV-1 e altri vaccini adenovirus vettorizzate) cellule, e tumorali derivate quali cellule HeLa (per l'HIV-1 vaccini).
L'uso di cellule tumorigeniche e derivate da tumore è una delle maggiori preoccupazioni per la sicurezza a causa della potenziale presenza di virus come retrovirus e virus oncogenici del DNA che potrebbero essere associati a tumorigencità, pertanto, rilevamento di virus persistenti, latenti del DNA e retrovirus endogeni nel vaccino substrati cellulari è importante per la sicurezza del vaccino, in particolare nello sviluppo di vaccini virali vivi, dove non ci sono o minima inattivazione di virus e di rimozione dei passaggi durante la produzione di vaccini.
induzione chimico è un metodo rigoroso per valutare la presenza di retrovirus endogeni come pure alcuni virus a DNA latenti che hanno il potenziale di attivazione e producono virus infettivo. Questo approccio è stato ampiamente utilizzato per le cellule di topo. Abbiamo ottimizzato condizioni di induzione virali in cellule di topo usando un standardizzato, altamente sensibile, singolo tubo PCR fluorescente migliorata trascrittasi inversa (STF-PERT) dosaggio. Abbiamo ulteriormente determinato le condizioni ottimali per l'attivazione del virus del DNA latente da una linea cellulare umana. Abbiamo esteso il test per sviluppare un approccio graduale per indurre e rilevare retrovirus endogeni e virus a DNA latenti durante la valutazione di substrati cellulari per la sicurezza del vaccino.
L'algoritmo di induzione chimica sviluppato utilizzando queste linee cellulari di controllo positivo può essere utilizzato per valutare la sicurezza di substrati cellulari vaccino innovativi per nuovi vaccini. Stiamo attualmente esaminando le tecnologie emergenti per il rilevamento di virus per identificare nuovi virus indotti e sconosciuti. Inoltre, stiamo studiando potenziali biomarcatori per l'induzione del virus
Indagini in vitro e in vivo per affrontare le preoccupazioni dei retrovirus nei prodotti biologici. I virus schiumosi di Simian (SFV) sono molto diffusi in tutti i primati non umani (NHP) e possono infettare l'uomo attraverso la trasmissione tra specie. Sebbene non vi siano ancora prove di patologie con SFV, il virus infettivo persiste nel DNA ospite. Pertanto, stiamo cercando di capire la latenza SFV e l'attivazione e fattori coinvolti nella trasmissione del virus, che sarà importante per la gestione delle infezioni SFV negli esseri umani.
Stiamo anche studiando le potenziali interazioni di SFV e SIV nel modello scimmia per prevedere l'esito di SFV e HIV-1 dual-infezioni nei casi umani segnalati, in Africa. Inoltre, i nostri studi trasfusionali nelle scimmie per quanto riguarda il rischio di trasmissione SFV da donatori di sangue infetti ai destinatari contribuiranno a decisioni politiche di donazione del sangue.
pubblicazioni
Genoma announc 17 agosto 2017; 5 (33): e00827-17
sequenza completa del genoma di un naturale isolato scimmie virus spumoso da macaco rhesus (SFVmmu_K3T).
Nandakumar S, Bae EH, Khan AS
Genoma announc 2017 ago 24; 5 (34): e00829-17
sequenza intero genoma della linea cellulare di insetto Spodoptera frugiperda Sf9.
Nandakumar S, Ma H, Khan AS
PDA J Pharm Sci Technol 2016 Nov-Dec; 70 (6): 591-5
Gruppo di interesse per le tecnologie di rilevamento dei virus avanzati (AVDTIG): sforzi per il sequenziamento ad alto rendimento (HTS) per il rilevamento dei virus.
Khan AS, Vacante DA, Cassart JP, Ng SH, Lambert C, Charlebois RL, King K
Viruses 23 nov 2016; 8 (11): 318
undicesima conferenza internazionale sui virus schiumosi - rapporto sulla riunione.
Buseyne F, Gessain A, Soares MA, Santos AF, Materniak-Kornas M, Lesage P, Zamborlini A, Lochelt M, Qiao W, Lindemann D, Wohrl BM, Stoye JP, Taylor IA, Khan AS
Viruses 31 marzo 2015; 7 (4): 1651-66
Decima conferenza internazionale sui virus schiumosi 2014 - risultati e prospettive.
Materniak M, Kubis P, Rola-Luszczak M, Khan AS, Buseyne F, Lindemann D, Lochelt M, Kuzmak J
Vaccino 2015 Jan 1; 33 (1): 73-5
The Brighton Collaboration Viral Vector Vaccines Safety Working Group (V3SWG).
Chen RT, Carbery B, Mac L, Berns KI, Chapman L, Condit RC, Excler JL, Gurwith M, Hendry M, Khan AS, Khuri-Bulos N, Klug B, Robertson JS, Seligman S, Sheets R, Williamson AL
PDA J Pharm Sci Technol 2014 Nov-Dec; 68 (6): 661-6
Nuove tecnologie e sfide per il rilevamento di nuovi virus.
Khan AS, Ma H, Taliaferro LP, Galvin TA, Shaheduzzaman S
PDA J Pharm Sci Technol 2014 Nov-Dec; 68 (6): 546-7
Introduzione e sintesi del seminario: tecnologie avanzate per la rilevazione dei virus nella valutazione di applicazioni e sfide biologiche.
Khan AS, Vacante DA
J Virol 2014 Jun 15; 88 (12): 6576-85
Identificazione di un romanzo rhabdovirus nelle linee cellulari di Spodoptera frugiperda.
Ma H, Galvin TA, Glasner DR, Shaheduzzaman S, Khan AS
Virus 2014 25 aprile 2014; 6 (5): 1876-1896
Valutazione del sistema ad ampio raggio di spettrometria di massa a ionizzazione PCR-elettrospray (PCR / ESI-MS) e microarray di virus per il rilevamento di virus.
Taliaferro LP, Galvin TA, Ma H, Shaheduzzaman S, Williams DK, Glasner DR, Khan AS
J Virol 2013 ago; 87 (15): 8792-7
Identificazione della ricombinazione nel gene dell'involucro del sierotipo 2 del virus schiumoso simiano isolato dal ciclopide di Macaca.
Galvin TA, Ahmed IA, Shahabuddin M, Bryan T, Khan AS
Viruses 6 giu 2013; 5 (6): 1414-30
Influenza dei virus schiumosi simian naturali (SFV) sulla progressione della malattia SIV nel modello macaco rhesus (Macaca mulatta).
Choudhary A, Galvin TA, Williams DK, Beren J, Bryant MA, Khan AS
J Virol 2013 feb; 87 (4): 2278-86
Nessuna evidenza di trasmissione del virus correlata al virus della leucemia murina xenotropica mediante trasfusione di sangue da macachi rhesus infetti.
Williams DK, Galvin TA, Gao Y, O'Neill C, Glasner D, Khan AS
PDA J Pharm Sci Technol 2012 1 ° novembre 2012; 66 (6): 502-11
agenti avventizi PDA / FDA e nuovi substrati cellulari: tecnologie emergenti e nuove sfide, 3-4 novembre 2011, Rockville, MD.
Khan AS, Lubiniecki A, King KE
Adv Virol 2011; 2011: 787394
Xenotropic e altri virus correlati al virus della leucemia murina nell'uomo.
Khan AS, McClure M, Kubo Y, Jolicoeur P
Biologicals 2011 Nov; 39 (6): 378-83
Studio del virus correlato al virus della leucemia murina xenotropica (XMRV) nelle linee umane e di altre cellule.
Williams DK, Galvin TA, Ma H, Khan AS
PDA J Pharm Sci Technol 2011 1 ° novembre 2011; 65 (6): 627-33
Metodi di prova attuali e sfide per la rilevazione di virus avventizi.
Khan AS
PDA J Pharm Sci Technol 2011 1 ° novembre 2011; 65 (6): 685-9
Rilevazione di retrovirus latenti in substrati cellulari correlati al vaccino: studio dell'attività di RT prodotta dall'induzione chimica di cellule Vero.
Ma H, Khan AS
Vaccino 2011 26 ottobre; 29 (46): 8429-37
Indagini sul circovirus suino di tipo 1 (PCV1) in linee cellulari correlate al vaccino.
Ma H, Shaheduzzaman S, Willliams DK, Gao Y, Khan AS
J Virol 2011 Jul; 85 (13): 6579-88
Induzione chimica di particelle endogene di retrovirus dalla linea cellulare vera di scimmie verdi africane.
Ma H, Ma Y, Ma W, Williams DK, Galvin TA, Khan AS....
www.fda.gov/vaccines-blood-biologics/biologics-research-projects/investigating-viruses-cells-used-make-vaccines-and-evaluating-potential-threat-posed-transmission
